Утверждаю

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации,

Первый заместитель

Министра здравоохранения

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

24 июня 2003 года

 

Дата введения -

30 июня 2003 года

 

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

 

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ СПИНОСАДА В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ

МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.1433-03

 

1. Подготовлены: Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (чл.-корр. РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина); Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. Довгилевич А.В.); при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов). Разработчики методики указаны в конце.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены впервые.

 

1. Вводная часть

 

Фирма-производитель: Дау Агро Сайенс.

Торговое название: Спинотор.

Название действующего вещества по ИСО: Спиносад.

Синонимы: XDE-105; DE-105.

Название действующего вещества по ИЮПАК: смесь (2R,3aR,5aR,5bS,9S,13S,14R,16aS,16bR)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-О-меил-альфа-L-маннопиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетрадеокси-бета-D-эритропиранозилокси)-9-этил-2,3,3а,5а,5b, 6,7,9,10,11,12,3,14,5,16а,16b-гексадекогидро-14-метил-1H-8-оксациклододека-[b]as-индацен-7,15-диона и (2S,3aR,5aS,5b5,9S,13S, 14R,16aS,16bS)-2-(6-дезокси-2,3,4-три-O-метил-aльфа-L-маннопиранозилокси)-13-(4-диметиламино-2,3,4,6-тетрадезокси-бета-D-эритропиранозилокси)-9-этил-2,3,3а,5а,5b,6,7,9,10,11,12,13,14,15,16а,16b-гексадекогидро-4,14-диметил-1H-8-оксациклододека[b]as-индацен-7,15-диона в соотношении от 50 - 95 до 50 - 5%.

Эмпирическая формула: Спинозин А - C41H65NO10; Спинозин Д - C42H67NO10.

Молекулярная масса: Спинозин А - 732,0; Спинозин Д - 746,0.

Спиносад представляет собой светло-серый или белый кристаллический порошок.

Температура плавления: Спинозин А - 84,0 - 99,5 °C; Спинозин Д - 161,5 - 170,0 °C.

                            -5

    Давление  паров 3,0 x 10   мПа (при 25 °C) - Спинозин А; 2,0 x

  -5

10   мПа (при 25 °C) - Спинозин Д.

Коэффициент распределения в системе октанол - вода:

Спинозин А - Кow logP: 2,8 (pH 5), 4,0 (pH 7), 5,2 (pH 9);

Спинозин Д - Kow logP: 3,2 (pH 5), 4,5 (pH 7), 5,2 (pH 9).

Растворимость в воде:

Спинозин А - 89 мг/л (дистиллированная вода), 235 мг/л (pH 7) (при 20 °C);

Спинозин Д - 0,5 мг/л (дистиллированная вода), 0,33 мг/л (pH 7) (при 20 °C).

Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °C):

Спинозин А: ацетон - 16,8, ацетонитрил - 13,4, хлористый метилен - 52,5, метанол - 19,0, гексан - 0,448, толуол - 45,7, н-октанол - 0,926;

Спинозин Д: ацетон - 1,01, ацетонитрил - 0,255, хлористый метилен - 44,8, метанол - 0,252, гексан - 0,743, толуол - 15,2, н-октанол - 0,127.

Оба вещества устойчивы к гидролизу при pH 5 и pH 7; ДТ50 при pH 9 составляет 200 дней для Спинозина А и 259 дней для Спинозина Д. Фотодеградация в воде: ДТ50 при pH 7 составляет 0,93 дня для Спинозина А и 0,82 дня для Спинозина Д.

Спиносад быстро разлагается под действием ультрафиолета, в почве метаболизируется бактериями с образованием "природных" соединений. Время полуразложения в почве ДТ50 при аэробном метаболизме составляет 9,4 - 17,3 дня; ДT50 при фотодеградации в почве составляет 8,7 дня для Спинозина А и 9,4 дня для Спинозина Д. При анаэробном водном метаболизме ДТ50 составляет 161 день для Спинозина А и 250 дней для Спинозина Д.

Краткая токсикологическая характеристика.

Спиносад относится к малоопасным соединениям по оральной (ЛД50 для самок крыс - 3783 мг/кг, для самцов крыс - более 5000 мг/кг) и дермальной (ЛД50 для кроликов более 2000 мг/кг) токсичности и умеренно опасным по ингаляционной (ЛК50 для крыс - 4 ч - более 5,18 мг/л) токсичности. Он не вызывает раздражения кожи, отмечается лишь слабое покраснение глаз у кроликов. Не обладает мутагенным и нейротоксичным свойствами или репродуктивной токсичностью.

В России гигиенические нормативы не установлены.

Область применения препарата.

Спиносад - инсектицид контактного и кишечного действия из группы спинозинов, обладающий парализующим эффектом. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых, бахромчатокрылых, прямокрылых, двукрылых и чешуекрылых (имаго и личинки) в посевах зерновых, плодовых, овощных и декоративных культур при норме расхода 5 - 40 г д.в./га. Препараты на основе Спиносада используется также для борьбы с синантропными насекомыми и в ветеринарии.

В России и странах СНГ проходят регистрационные испытания препарата Спинотор в качестве инсектицида на огурцах и перцах закрытого грунта, в яблоневых садах и на посадках картофеля и капусты с нормой расхода 1,0 - 1,5 л/га по препарату при однократной обработке (яблони и картофель), при двукратной обработке на огурцах закрытого грунта.

 

2. Методика измерения концентраций Спиносада

в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной

жидкостной хроматографии

 

2.1. Основные положения

 

2.1.1. Принцип методики

Методика основана на определении концентрации веществ с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором.

Отбор проб воздуха осуществляется концентрированием аэрозоля на бумажные фильтры "синяя лента". Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии компонентов препаративной формы.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода (Р = 0,95)

Число параллельных определений - 6.

Предел обнаружения в хроматографируемом объеме - 5 нг (каждого из соединений).

Предел обнаружения в воздухе при отборе 50 куб. дм воздуха - 0,02 мг/куб. м.

Диапазон определяемых концентраций - 0,02 - 0,2 мг/куб. м (при отборе 50 куб. дм воздуха).

Среднее значение определения - 96%.

Стандартное отклонение (S) - 2,23%.

Относительное стандартное отклонение (DS) - 0,91%.

Доверительный интервал среднего - 2,34%.

Суммарная погрешность измерения не превышает 20,4%.

 

2.2. Реактивы, растворы и материалы

 

Спинозин А с содержанием д.в. 91,2%

(Дау Агро Сайенс, Англия)

Спинозин Д с содержанием д.в. 94%

(Дау Агро Сайенс, Англия)

Аммоний уксусно-кислый, хч                        ГОСТ 3117-78

Ацетон, чда                                       ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил для жидкостной хроматографии (УФ      ТУ 6-09-4326-76

210 нм)

Вода дистиллированная, деионизованная или

перегнанная над КМnО4

Метанол-яд, хч                                    ГОСТ 6995-77

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные,     ТУ 6-09-2678-77

предварительно промытые ацетоном

 

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

 

Жидкостной хроматограф Waters (США) с

ультрафиолетовым детектором

Хроматографическая колонка стальная, длиной

15 см, внутренним диаметром 3,9 мм, содержащая

ХТеrrа MS C18, зернение 5 мкм; предколонка

Symmetry Sheld RP 18, длиной 2 см, внутренним

диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм

Микрошприц для жидкостного хроматографа,

вместимостью 50 - 100 мкл

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или        ТУ 25-11-917-76

аналогичный

Весы аналитические типа ВЛА-200                   ГОСТ 34104-80Е

Насос водоструйный                                ГОСТ 10696-75

Аспирационное устройство типа ЭА-1 или            ТУ 25-11-1414-78

аналогичное

Барометр                                          ТУ 2504-1797-75

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена        ГОСТ 215-73Е

деления 1 °C, пределы измерения 0 - 55 °C

Колбы мерные, вместимостью 100 и 1000 мл          ГОСТ 1770-74

Цилиндры мерные, вместимостью 10 и 500 мл         ГОСТ 1770-74Е

Колбы грушевидные со шлифом, вместимостью         ГОСТ 10394-72

100 мл

Пробирки центрифужные                             ГОСТ 25336-82Е

Стаканы химические, вместимостью 100 мл           ГОСТ 25336-82Е

Пипетки, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл             ГОСТ 20292-74

Воронки химические конусные, диаметром            ГОСТ 25336-82Е

34 - 40 мм

Груша резиновая

Фильтродержатели

Стеклянные палочки

 

2.4. Отбор проб

 

Воздух со скоростью 5 куб. дм/мин. пропускают через фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации вещества на уровне 0,02 мг/куб. м следует отобрать 50 куб. дм воздуха.

Фильтры с отобранными пробами, помещенные в герметически закрываемые склянки, можно хранить в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C в течение 15 дней.

 

2.5. Подготовка к определению

 

2.5.1. Приготовление 2%-ного раствора аммония уксусно-кислого

В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 2 г уксусно-кислого аммония, добавляют 50 - 70 мл дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества, доводят дистиллированной водой до метки, вновь перемешивают.

2.5.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

Отмеряют по 350 мл ацетонитрила и метанола, переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, добавляют 200 мл 2%-ного раствора уксусно-кислого аммония (по п. 2.5.1), фильтруют и дегазируют.

2.5.3. Кондиционирование колонки

Промыть колонку для ВЭЖХ подвижной фазой при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. в течение 30 - 45 мин. до получения стабильной базовой линии.

2.5.4. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор Спинозина А (Спинозина Д) с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,1094 г препарата, содержащего 91,4% д.в. (0,1064 г препарата, содержащего 94% д.в.), в смеси ацетонитрил:метанол в соотношении 1:1 (по объему) в мерной колбе вместимостью 100 мл. Затем по 10,0 мл стандартных растворов Спинозина А или Спинозина Д с концентрацией 100 мкг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем до метки смесью растворителей ацетонитрил:метанол (1:1). Получают стандартные растворы, содержащие по 10,0 мкг/мл Спинозина А или Спинозина Д. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят стандартные растворы, содержащие по 2,5; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/мл Спинозина А и Спинозина Д.

Стандартные растворы можно хранить в холодильнике при (6 +/- 2) °C в течение 3 месяцев.

2.5.5. Построение градуировочных графиков

Для построения градуировочных графиков в инжектор хроматографа вводят по 20 мкл рабочего стандартного раствора Спинозина А или Спинозина Д с концентрацией 0,25; 1,0; 0,5 и 0,25 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочные графики зависимости площади хроматографического пика от концентраций Спинозина А и Спинозина Д в растворе (мкг/мл).

 

2.6. Описание определения

 

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, заливают 10 мл ацетона, оставляют на 10 - 15 мин., периодически перемешивая. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой. Фильтр еще дважды обрабатывают новыми порциями ацетона объемом 10 мл.

Объединенный экстракт упаривают в грушевидной колбе на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 40 °C, оставшийся растворитель отдувают потоком теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила, фильтруют или центрифугируют для удаления взвеси и хроматографируют.

 

2.7. Условия хроматографирования

 

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Waters (США).

Колонка стальная, длиной 15 см, внутренним диаметром 3,9 мм, содержащая ХТеrrа MS C18, зернением 5 мкм, предколонка Symmetry Sheld RP 18, длиной 2 см, внутренним диаметром 3,9 мм, зернением 5 мкм.

Температура колонки: комнатная.

Подвижная фаза: ацетонитрил - метанол - 2%-ный уксусно-кислый аммоний (35:35:20, по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны: 245 нм.

Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу.

Объем вводимой пробы: 20 мкл.

Время выхода:

Спинозин А: 11,432 - 11,437 мин.;

Спинозин Д: 14,910 - 14,915 мин.

Линейный диапазон детектирования: 5,0 - 50,0 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,5 мкг/мл, разбавляют ацетонитрилом.

 

2.8. Обработка результатов анализа

 

Содержание Спиносада в пробе воздуха рассчитывают по формуле:

 

                            (Са + Сд) x W

                        X = -------------,

                                  V

 

где:

X - содержание Спиносада в пробе воздуха, мг/куб. м;

Са - концентрация Спинозина А в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

Сд - концентрация Спинозина Д в хроматографируемом растворе, найденная по калибровочному графику, мкг/мл;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

V - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к стандартным условиям (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C), куб. дм.

 

3. Требования техники безопасности

 

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

 

4. Разработчики

 

Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук, Довгилевич Е.В., канд. биол. наук, Калинина Т.С., канд. с.-х. наук, Довгилевич А.В., канд. хим. наук, Устименко Н.В., канд. биол. наук.

Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.

Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095) 976-37-68, факс: (095) 976-43-26.