Утверждаю
И.о. Председателя
Госкомсанэпиднадзора
России -
Заместитель
Главного
государственного
санитарного
врача Российской
Федерации
Г.Г.ОНИЩЕНКО
8 июня 1996 года
Дата введения -
с момента
утверждения
4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ
СТРЕПТОДЕКАЗЫ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
МУК 4.1.256-96
1. Методические
указания по измерению концентрации вредных веществ в воздухе рабочей зоны
(выпуск 30) разработаны с целью обеспечения контроля
соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно
допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия
(ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при
осуществлении санитарного контроля.
2. Методические
указания по измерению концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны
утверждены и.о. Председателя Госкомсанэпиднадзора России - заместителем
Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 8 июня 1996 г.
3. Введены впервые.
4. Методические
указания по контролю вредных веществ в воздухе рабочей зоны разработаны и
подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух
рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа
12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам измерения
концентраций вредных веществ" и ГОСТа Р 1.5-92,
п. 7.3.
Методические
указания одобрены на совместном заседании группы Главного эксперта Федеральной
комиссии по санитарно-гигиеническому нормированию "Лабораторно-инструментальное
дело и метрологическое обеспечение" и методбюро п/секции
"Промышленно-санитарная химия" Проблемной комиссии "Научные
основы гигиены труда и профпатологии".
Ответственные
исполнители: Г.А. Дьякова, С.И. Муравьева.
Исполнители: Г.А.
Дьякова, Н.С. Горячев, Л.Г. Макеева, Г.В. Муравьева, Е.М. Малинина, Е.В.
Грыжина, Е.Н. Грицун.
Стрептодеказа
М. м. 70000 -
130000.
Структурная формула
(не приводится).
n -
100 мол. % звеньев
полиглюкина (ПГ); Y - 24 мол. %
окисленных
звеньев ПГ; р - мол.
% NH
-групп стрептокиназы,
2
модифицированной ПГ.
Белый или с
желтоватым оттенком лиофилизированный порошок или пористая масса, уплотненная в
таблетку. Легко растворим в воде, растворе натрия хлорида 0,9% изотонического
(ГФ, х, стр. 756).
В воздухе находится
в виде аэрозоля.
Проявляет
сенсибилизирующие и аллергические свойства.
ПДК в воздухе - 1
мг/куб. м.
Характеристика
метода
Методика основана
на использовании высокоспецифических антител к стрептодеказе, проведении
реакции антиген-антитело с антителами, меченными ферментом-маркером
пероксидазой, и спектрофотометрическом тестировании активности пероксидазы при
длине волны 492 нм.
Отбор проб проводят
с концентрированием на фильтр.
Нижний предел измерения
концентрации в анализируемом растворе - 0,03 мкг.
Диапазон изменяемых
концентраций - от 0,12 до 1,2 мг/куб. м.
Нижний предел
измерения в воздухе - 0,12 мг/куб. м (при отборе 50 л воздуха).
Измерению не мешают
белки (бычий сывороточный альбумин, яичный альбумин), ферменты (липаза Pen.
solitum, L - аспарагиназа Е. coli).
Суммарная
погрешность не превышает +/- 25%.
Время выполнения
измерений, включая отбор проб - 4 ч.
Приборы,
аппаратура, посуда
Аспирационное
устройство
Весы
лабораторные 2-го класса
точности,
тип ВЛР-200: погрешность
взвешивания
по шкале +/- 0,15 мг
ГОСТ 24104-88
Иономер
универсальный ЭВ-74:
погрешность
измерений +/- 0,005
ГОСТ 22261-82
Дозаторы
пипеточные
ТУ 64-1-3329-81
Колбы
мерные 2-25-2, 2-50-2, 2-500-2,
2-1000-2,
2-го класса точности
ГОСТ 1770-74
Пипетки
6-2-5, 6-5-10
ГОСТ 20292-74
Планшеты
для иммуноферментного анализа
ТУ 64-2-278-78
Считыватель
АКИ-Ц-0,1 ТУ
64-16-17-89
Стаканы
химические вместимостью 0,05, 0,15,
0,2
и 1 л
ГОСТ 19980-80
Термостат
суховоздушный тип ТС-8М ТУ 64-1-1382-72
Фильтр
АФА-ВП-20 с фильтродержателем
ТУ 957186-76
Холодильник
бытовой
ГОСТ 26678-85
Цилиндр
мерный 2-100
ГОСТ 1770-74.
Реактивы,
растворы, материалы
Лимонная
кислота моногидрат, ч.д.а.
0,1
М раствор
ГОСТ 3652-69
Натрий
фосфорнокислый однозамещенный,
двухводный ГОСТ
245-76
Натрий
фосфорнокислый двузамещенный
12-водный,
ч.д.а.
ГОСТ 11773-76
Натрий
хлорид (ГФ, Х, 426) 0,85; 2,92%.
Приготовление 0,1
моль/л фосфатного буферного раствора рН 7,2 +/- 0,1.
35,5 г натрия фосфорнокислого двузамещенного растворяют в 1000 мл
дистиллированной воды в мерной колбе вместимостью 1000 мл.
4 г натрия
фосфорнокислого однозамещенного растворяют 250 мл воды в мерной колбе
вместимостью 250 мл.
1000 мл раствора
натрия фосфорнокислого двузамещенного и 250 мл раствора натрия фосфорнокислого
однозамещенного смешивают в стакане вместимостью 2000 мл.
Раствор хранится в
течение 2 месяцев в холодильнике.
Приготовление
буфера "А". 1000 мл фосфатного буферного раствора рН 7,2 смешивают с
8,47 г хлористого натрия. Раствор хранят в холодильнике в течение 2 месяцев.
Твин-20 "Серва",
ФРГ.
Приготовление
буфера "В". К 1000 мл раствора фосфатного буфера рН 7,2 +/- 0,1
прибавляют 29,2 г хлористого натрия и 1 мл твина-20. Раствор хранят в
холодильнике в течение 2 месяцев.
Приготовление 0,1
моль/л фосфатноцитратного буферного раствора рН 5,0
+/- 0,1. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 7,3 г лимонной кислоты
(моногидрат) и 9,47 г натрия фосфорнокислого однозамещенного безводного и
доводят раствор до метки дистиллированной водой при перемешивании. Раствор
хранят при температуре -10 °С в течение 6 месяцев.
О-фенилендиамин,
х.ч., 0,04%-ный раствор ТУ
6-09-5880-69.
Приготовление 0,04%
раствора о-фенилендиамина. Навеску 10 г о-фенилендиамина растворяют в 24 мл
фосфатноцитратного буфера в стакане вместимостью 50 мл. Раствор готовят
непосредственно перед измерением.
Перекись водорода ГОСТ 10929-76.
Приготовление
раствора субстратной смеси. К 24 мл раствора о-фенилендиамина прибавляют
дозатором вместимостью 20 мкл 14 мкл концентрированной перекиси водорода. Смесь
готовят непосредственно перед измерениями.
Стрептодеказа
раствора с = 0,6 мкг/мл,
С
= 0,12 мкг/мл ФС
42-2471-87.
Приготовление
основного раствора стрептодеказы с концентрацией 0,6 мкг/мл. Точную навеску 25
мг (7,2% белка) стрептодеказы растворяют в 6 мл дистиллированной воды. Массовая
концентрация стрептодеказы в полученном растворе составляет 0,30 мг/мл. Из
полученного раствора отбирают 1 мл дозатором на 1 мл и вносят в мерную колбу,
вместимостью 500 мл. Объем доводят до метки дистиллированной водой.
Используют
свежеприготовленный раствор.
Приготовление
раствора стрептодеказы с концентрацией 0,12 мкг/мл. 5 мл основного раствора
стрептодеказы пипеткой вместимостью 5 мл переносят в мерную колбу вместимостью
25 мл. Объем доводят до метки буфером "А". Используют
свежеприготовленный раствор.
Серная
кислота, х.ч., концентрированная
4
М раствор ГОСТ 4204-77.
Приготовление 4 М
раствора серной кислоты. К 8,5 дистиллированной воды, используя пипетку
вместимостью 1 мл, добавляют 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Раствор
хранят при комнатной температуре.
Антисыворотка к стрептодеказе,
ВНИТИАФ.
Приготовление
раствора антисыворотки. Содержимое флакона с лиофилизированной антисывороткой к
стрептодеказе растворяют в 5 мл буфера "В", используя пипетку
вместимостью 5 мл.
Далее из
полученного раствора отбирают 0,5 мл дозатором на 1 мл и переносят в мерную
колбу вместимостью 500 мл, доводят объем до метки буфером "В".
Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
Подготовка
сенсибилизированного планшета. Раствор стрептодеказы с концентрацией 0,12
мкг/мл заливают дозатором вместимостью 0,2 мл по 0,2 мл во все лунки (кроме А1) полистиролового планшета для ИФА. Планшет закрывают
крышкой и выдерживают 18 часов в холодильнике. Из лунок выливают раствор
стрептодеказы и промывают 4 раза буфером "В" с помощью
полуавтоматической промывалки.
Сенсибилизированный
таким образом планшет используют в анализе или запаивают в полиэтиленовый мешок
и хранят в холодильнике в течение 3 месяцев.
Антитела
диагностические против иммуноглобулинов кролика, меченные пероксидазой, ВФС
42-8-ВС-85 (антивидовой конъюгат).
Приготовление
раствора антивидового конъюгата. Содержимое ампулы с антивидовым конъюгатом
растворяют в 20 мл буфера "В", используя пипетку вместимостью 10 мл.
Раствор готовят непосредственно перед употреблением.
Отбор пробы
воздуха
Воздух с объемным расходом
10 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-20, закрепленный в фильтродержателе.
Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 50 л воздуха. Пробы хранят менее
суток.
Подготовка
к выполнению измерений
Градуировочны
растворы готовят согласно таблице. Хранят в холодильнике не более 3 суток.
Таблица
ШКАЛА
ГРАДУИРОВОЧНЫХ РАСТВОРОВ
|
N
стандартов
|
Основной р-р
стрептодеказы, мл
|
Вода,
мл
|
Концентрация
стрептодеказы в
градуировочном р-ре, мкг/мл
|
|
1
|
0,2
|
0,2
|
0,300
|
|
2
|
0,2
|
0,6
|
0,150
|
|
3
|
0,2
|
1,4
|
0,080
|
|
4
|
0,2
|
2,8
|
0,040
|
|
5
|
0,2
|
3,8
|
0,030
|
|
6
|
0,2
|
5,8
|
0,020
|
Проведение
анализа
1. Во все промытые,
не содержащие раствор лунки (кроме А1) предварительно сенсибилизированного
планшета заливают с помощью дозатора на 0,1 мл по 0,1 мл раствора
антисыворотки, затем в лунки В1, С1 заливают по 0,1 мл буфера "В", в
лунки 2 - 7 рядов А, В, С - по 0,1 мл градуировочных
растворов. Для каждого стандартного раствора отводят по 3 лунки. Во всех лунках
общий объем составляет 0,2 мл, лунка А1 остается
пустой.
Планшет закрывают
крышкой и инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.
2. Выливают
содержимое планшета и промывают его 4 раза буфером "В".
3. Во все лунки
(кроме А1) вносят по 0,2 мл раствора антивидового
конъюгата, закрывают планшет крышкой и инкубируют 1,5 ч при температуре 37 °С.
4. Четырехкратная
промывка по п. 2.
5. Проведение
ферментативной реакции.
В каждую лунку
вносят дозатором на 0,1 мл по 0,1 мл раствора с субстратной смесью. Инкубируют
по секундомеру 10 мин. Затем в той же последовательности в лунки вносят
дозатором на 0,2 мл по 0,075 мл раствора 4 М серной кислоты для остановки
реакции.
6. Для измерения
оптической плотности растворов в лунках планшет помещают в рамку считывателя
АКИ.Ц.0,1. Измерение проводят при длине волны 492 нм, причем в качестве
раствора сравнения используют раствор субстратной смеси в лунке А1.
Строят
градуировочный график. На масштабно-координатной бумаге по оси абсцисс
откладывают концентрацию стрептодеказы в градуировочных растворах в единицах
концентрации (мкг/мл), а по оси ординат - значения оптической плотности при
длине волны 492 нм. Градуировочный график строят одновременно с проведением
измерений в пробах.
Проведение
измерения
После отбора пробы
воздуха фильтры АФА-ВП-20 помещают в стаканы вместимостью 50 мл и приливают 20
мл буфера "А", периодически встряхивая, выдерживают в течение 10 мин.
Затем с помощью дозатора на 1 мл отбирают 1 мл раствора и переносят в мерную
колбу вместимостью 50 мл, объем доводят до метки буфером "В".
Анализ проводят
аналогично процедуре при построении калибровочной зависимости.
Растворы могут
храниться до проведения анализа в течение 2 суток в холодильнике.
По градуировочному
графику на основании измерения значений оптической плотности в растворах проб
определяют соответствующие концентрации стрептодеказы в пробах (мкг/мл).
Расчет
концентрации
Концентрацию
стрептодеказы (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по формуле:
а х в
С = -----,
V х К
где:
а - концентрация
стрептодеказы в анализируемом растворе, мкг;
в - общий объем
анализируемого раствора, мл;
V - объем воздуха,
отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1).
К -
коэффициент десорбции вещества с фильтра, равный 0,85.
Методические
указания разработаны ВНИИТИАФ, г. С.-Петербург.
Приложение
1
ПРИВЕДЕНИЕ
ОБЪЕМА ВОЗДУХА К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
(ТЕМПЕРАТУРА 20 °С И ДАВЛЕНИЕ 760 ММ РТ. СТ.)
Приведение объема
воздуха к стандартным условиям проводят по формуле:
V х (273 + 20) х Р
t
V = -------------------,
ст (273 + t°) х 760
где:
V - объем воздуха, отобранного для анализа, л;
t
Р - барометрическое давление,
мм рт. ст. (760 мм рт. ст. =
101,33 кПа);
t° -
температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
Для удобства
расчета V
следует пользоваться таблицей
ст
коэффициентов
(Приложение 2). Для
приведения объема воздуха к
температуре
20 °С и
давлению 760 мм рт. ст. (101,33
кПа) надо
умножить V на
соответствующий коэффициент.
t
Приложение
2
КОЭФФИЦИЕНТ
К ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА
ВОЗДУХА К
СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ
|
Давление Р, кПа/мм рт. ст.
|
|
°С
|
730
|
734
|
738
|
742
|
746
|
750
|
754
|
758
|
760
|
764
|
|
-30
|
1,1582
|
1,1646
|
1,1709
|
1,1772
|
1,1836
|
1,1899
|
1,1963
|
1,2026
|
1,2058
|
1,2122
|
|
-26
|
1,1393
|
1,1456
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1644
|
1,1705
|
1,1768
|
1,1831
|
1,1862
|
1,1925
|
|
-22
|
1,1212
|
1,1274
|
1,1336
|
1,1396
|
1,1458
|
1,1519
|
1,1581
|
1,1643
|
1,1673
|
1,1735
|
|
-18
|
1,1036
|
1,1097
|
1,1158
|
1,1218
|
1,1278
|
1,1338
|
1,1399
|
1,1400
|
1,1490
|
1,1551
|
|
-14
|
1,0866
|
1,0926
|
1,0986
|
1,1045
|
1,1105
|
1,1164
|
1,1224
|
1,1284
|
1,1313
|
1,1373
|
|
-10
|
1,0701
|
1,0760
|
1,0819
|
1,0877
|
1,0986
|
1,0994
|
1,1053
|
1,1112
|
1,1141
|
1,1200
|
|
-6
|
1,0540
|
1,0599
|
1,0657
|
1,0714
|
1,0772
|
1,0829
|
1,0887
|
1,0945
|
1,0974
|
1,1032
|
|
-2
|
1,0385
|
1,0442
|
1,0499
|
1,0556
|
1,0613
|
1,0669
|
1,0726
|
1,0784
|
1,0812
|
1,0869
|
|
0
|
1,0309
|
1,0366
|
1,0423
|
1,0477
|
1,0535
|
1,0591
|
1,0648
|
1,0705
|
1,0733
|
1,0789
|
|
+2
|
1,0234
|
1,0291
|
1,0347
|
1,0402
|
1,0459
|
1,0514
|
1,0571
|
1,0627
|
1,0655
|
1,0712
|
|
+6
|
1,0087
|
1,0143
|
1,0198
|
1,0253
|
1,0309
|
1,0363
|
1,0419
|
1,0475
|
1,0502
|
1,0557
|
|
+10
|
0,9944
|
0,9999
|
1,0054
|
1,0108
|
1,0162
|
1,0216
|
1,0272
|
1,0326
|
1,0353
|
1,0407
|
|
+14
|
0,9806
|
0,9860
|
0,9914
|
0,9967
|
1,0027
|
1,0074
|
1,0128
|
1,0183
|
1,0209
|
1,0263
|
|
+18
|
0,9671
|
0,9725
|
0,9778
|
0,9880
|
0,9884
|
0,9936
|
0,9989
|
1,0043
|
1,0069
|
1,0122
|
|
+20
|
0,9605
|
0,9658
|
0,9711
|
0,9783
|
0,9816
|
0,9868
|
0,9921
|
0,9974
|
1,0000
|
1,0053
|
|
+22
|
0,9539
|
0,9592
|
0,9645
|
0,9696
|
0,9749
|
0,9800
|
0,9853
|
0,9906
|
0,9932
|
0,9985
|
|
+24
|
0,9475
|
0,9527
|
0,9579
|
0,9631
|
0,9683
|
0,9735
|
0,9787
|
0,9839
|
0,9865
|
0,9917
|
|
+26
|
0,9412
|
0,9464
|
0,9516
|
0,9566
|
0,9618
|
0,9669
|
0,9721
|
0,9773
|
0,9799
|
0,9851
|
|
+28
|
0,9349
|
0,9401
|
0,9453
|
0,9503
|
0,9655
|
0,9605
|
0,9657
|
0,9708
|
0,9734
|
0,9785
|
|
+30
|
0,9288
|
0,9339
|
0,9891
|
0,9440
|
0,9432
|
0,9542
|
0,9594
|
0,9645
|
0,9670
|
0,9723
|
|
+34
|
0,9167
|
0,9218
|
0,9268
|
0,9318
|
0,9368
|
0,9418
|
0,9468
|
0,9519
|
0,9544
|
0,9595
|
|
+38
|
0,9049
|
0,9099
|
0,9149
|
0,9198
|
0,9248
|
0,9297
|
0,9347
|
0,9397
|
0,9421
|
0,9471
|