"Измерение концентраций протиоконазола в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания. МУК 4.1.1979-05" // Мегабиблиотека по охране труда

Утверждаю

Руководитель

Федеральной службы

по надзору в сфере защиты

прав потребителей

и благополучия человека,

Главный государственный

санитарный врач

Российской Федерации

Г.Г.ОНИЩЕНКО

21 апреля 2005 года

Дата введения -

1 июля 2005 года

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ПРОТИОКОНАЗОЛА В ВОЗДУХЕ

РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ

ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

МУК 4.1.1979-05

Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в воздухе рабочей зоны массовой концентрации протиоконазола в диапазоне 0,05 - 1,0 мг/куб. м.

2-[(RS)-2-гидрокси-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)пропил]-2Н-1,2,4-триазол-3(4Н)-тион (IUPAC).

Структурная формула (не приводится).

Эмпирическая формула: C H Cl N OS.

14 15 2 3

Молекулярная масса: 344,3.

Белое или светло-бежевое твердое вещество без запаха. Температура

-7

плавления: 139,1 - 144,5 °C. Давление паров при 20 °C: << 4 х 10 Па.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 4,16 (pH 4), 3,82

(pH 7) и 2,0 (pH 9). Растворимость (г/куб. дм) при 20 °C: ацетон - более

250, этилацетат - более 250, дихлорметан - 88, ацетонитрил - 69;

растворимость в воде - 0,005 (pH 4), 0,3 (pH 8) и 2,0 (pH 9).

Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой (DT =

120 дней) и щелочной (DT > 1 года) средах. В присутствии света в водных

фотолитических условиях протиоконазол достаточно быстро деградирует с

периодом полураспада 47,7 часа.

Агрегатное состояние в воздухе рабочей зоны - аэрозоль.

Краткая токсикологическая характеристика

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - более 6200 мг/кг;

острая дермальная токсичность (LD ) для крыс - более 2000 мг/кг; острая

ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 4990 мг/куб. м воздуха.

Протиоконазол не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз.

Гигиенические нормативы

ОБУВ в воздухе рабочей зоны 1,0 мг/куб. м.

Область применения препарата

Протиоконазол - фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество обладает защитным, искореняющим и лечебным действием.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью (дельта), не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерения

Измерения концентраций протиоконазола выполняют методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на обращенной фазе с ультрафиолетовым детектором.

Концентрирование протиоконазола из воздуха осуществляют на бумажные фильтры "синяя лента", экстракцию с фильтра проводят ацетонитрилом.

Нижний предел измерения в анализируемом объеме пробы - 1 нг.

Определению не мешают тебуконазол, основной метаболит протиоконазола - протиоконазол-дестио и компоненты препаративной формы.

3. Средства измерений, вспомогательные устройства,

реактивы и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым

детектором с переменной длиной волны

(фирмы Perkin-Elmer, США) Номер Госреестра 15945-97

Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104

Пробоотборное устройство ОП-442ТЦ

(ЗАО "ОПТЭК", г. Санкт-Петербург) или

аспирационное устройство ЭА-1 ТУ 25-11-1414-78

Барометр-анероид М-67 ТУ 2504-1797-75

Термометр лабораторный шкальный ТЛ-2, цена

деления 1 °C, пределы измерения 0 - 55 °C ТУ 215-73Е

Колбы мерные вместимостью 100 и 1000 куб. см ГОСТ 1770

Пипетки градуированные 2 класса точности

вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см ГОСТ 29227

Пробирки градуированные вместимостью

5 или 10 куб. см ГОСТ 1770

Цилиндры мерные 2 класса точности

вместимостью 500 и 1000 куб. см ГОСТ 1770

Цилиндры мерные 2 класса точности с

пришлифованной пробкой вместимостью 25 куб. см ГОСТ 1770

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими

характеристиками.

3.2. Реактивы

Протиоконазол с содержанием действующего

вещества 99,8% (Байер, Германия)

Ацетонитрил для хроматографии, х.ч. ТУ-6-09-4326-76

Вода бидистиллированная, деионизованная или

перегнанная над KMnO ГОСТ 6709

Кислота ортофосфорная, ч., 85% ГОСТ 6652

Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной

или более высокой квалификацией.

3.3. Вспомогательные устройства, материалы

Бумажные фильтры "синяя лента", обеззоленные ТУ 6-09-2678-77

Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336

Груша резиновая

Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм

Насос водоструйный ГОСТ 10696

Пробирки центрифужные ГОСТ 25336

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М

или ротационный вакуумный испаритель В-169

фирмы Buchi, Швейцария ТУ 25-11-917-74

Стаканы химические вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336

Стекловата

Стеклянные палочки

Установка для перегонки растворителей

Набор для фильтрации растворителей

через мембрану

Холодильник водяной, обратный ГОСТ 9737

Хроматографическая колонка стальная,

длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм,

содержащая Кромасил 100 С18, зернением 8 мкм

Шприц для ввода образцов для жидкостного

хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм

Допускается применение хроматографических колонок и другого

оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

4. Требования безопасности

4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.

4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

5. Требования к квалификации операторов

К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. Условия измерений

При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °C и относительной влажности не более 80%;

- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят очистку ацетонитрила (при необходимости), подготовку подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1. Очистка ацетонитрила

Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

7.2. Приготовление 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты

Для приготовления 0,02 М раствора ортофосфорной кислоты в мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 1,36 куб. см ортофосфорной кислоты, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.

7.3. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 400 куб. см 0,02 М ортофосфорной кислоты, добавляют 600 куб. см ацетонитрила, перемешивают, фильтруют и дегазируют.

7.4. Кондиционирование хроматографической колонки

Промывают колонку подвижной фазой (п. 7.3) в течение 30 мин. при скорости подачи растворителя 1,0 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.

7.5. Приготовление градуировочных растворов

7.5.1. Исходный раствор протиоконазола для градуировки (концентрация 500 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,05 г протиоконазола, доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике не более 2 недель.

Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора для градуировки.

7.5.2. Раствор N 1 протиоконазола для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 2 куб. см исходного раствора протиоконазола с концентрацией 500 мкг/куб. см (п. 7.5.1), разбавляют ацетонитрилом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение 10 дней.

7.5.3. Рабочие растворы N 2 - 5 протиоконазола для градуировки (концентрация 0,05 - 1,0 мкг/куб. см). В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 0,5; 1,0; 5,0 и 10,0 куб. см раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.5.2), доводят до метки подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией протиоконазола 0,05; 0,1; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.

Растворы хранятся в холодильнике в течение суток.

7.6. Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.005-88 "ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны". Воздух с объемным расходом 5 куб. дм/мин. аспирируют через бумажный фильтр "синяя лента", помещенный в фильтродержатель.

Для измерения концентрации протиоконазола на уровне 0,05 мг/куб. м необходимо отобрать 50 куб. дм воздуха. Срок хранения отобранных проб, помещенных в полиэтиленовые пакеты, в холодильной камере при 4 °C - 3 дня.

7.7. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации протиоконазола в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.

В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 7.7.1. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Устанавливают площадь пика протиоконазола.

7.7.1. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором

Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:

Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая кромасил 100 С18, зернением 8 мкм

Температура колонки: комнатная

Подвижная фаза: 0,02 М ортофосфорная кислота-ацетонитрил (40:60, по объему)

Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин.

Рабочая длина волны: 213 нм

Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу

Объем вводимой пробы: 20 куб. мм

Ориентировочное время выхода протиоконазола: 9,6 - 9,8 мин.

Линейный диапазон детектирования: 1 - 20 нг.

Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор протиоконазола с концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой (подготовленной по п. 7.3).

Градуировочный график проверяют ежедневно по анализу 2 растворов для градуировки различной концентрации. Если значения площади отличаются более чем на 9% от данных, заложенных в градуировочную характеристику, ее строят заново, используя свежеприготовленные рабочие растворы для градуировки.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой переносят в химический стакан вместимостью 100 куб. см, заливают 15 куб. см ацетонитрила, помещают в темное место, периодически встряхивая в течение 10 минут. Растворитель сливают, отжимая фильтр стеклянной палочкой, в цилиндр с пришлифованной пробкой вместимостью 25 куб. см. Фильтр обрабатывают новой порцией ацетонитрила объемом 10 куб. см, экстракты объединяют.

Общий объем экстракта в цилиндре доводят до 25 куб. см ацетонитрилом, тщательно перемешивают. Отбирают аликвоту объемом 2 куб. см, переносят в градуированную пробирку, добавляют 2 куб. см подвижной фазы, приготовленной по п. 7.3, перемешивают и анализируют при условиях хроматографирования, указанных в п. 7.7.1.

Пробу вводят в инжектор хроматографа не менее двух раз. Устанавливают площадь пика, с помощью градуировочного графика определяют концентрацию протиоконазола в хроматографируемом растворе.

Перед анализом опытной пробы проводят хроматографирование холостой (контрольной) пробы - экстракта неэкспонированного фильтра.

9. Обработка результатов измерений

Массовую концентрацию протиоконазола в пробе воздуха рабочей зоны X, мг/куб. м, рассчитывают по формуле:

X = C x 2W / V ,

где:

C - концентрация протиоконазола в хроматографируемом растворе,

найденная по градуировочному графику в соответствии с величиной площади

хроматографического пика, мкг/куб. см;

2 - коэффициент, учитывающий разбавление аликвоты экстракта перед

хроматографированием;

W - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;

V - объем пробы воздуха, отобранный для анализа, приведенный к

стандартным (давление 760 мм рт. ст., температура 20 °C) условиям

V = 0,386 x P x ut / (273 + T),

где:

T - температура воздуха при отборе пробы (на входе в аспиратор), град.

P - атмосферное давление при отборе пробы, мм рт. ст.;

u - расход воздуха при отборе пробы, куб. дм/мин.;

t - длительность отбора пробы, мин.

Примечание: Идентификация и расчет концентрации протиоконазола в пробах

могут быть проведены с помощью программ обработки хроматографических данных

с применением компьютера, включенного в аналитическую систему.

10. Оформление результатов измерений

За результат анализа (X) принимается среднее арифметическое результатов

двух параллельных определений X и X (X = (X + X ) / 2), расхождение

1 2 1 2

между которыми не превышает значений норматива оперативного контроля

сходимости (d): |X - X | <= d.

1 2

d = d x X / 100, мг/куб. м,

отн.

где:

d - норматив оперативного контроля сходимости, мг/куб. м;

d - норматив оперативного контроля сходимости, % (равен 15%).

отн.

Результат количественного анализа представляют в виде:

- результат анализа X (мг/куб. м), характеристика погрешности дельта,

%, P = 0,95 или

X +/- ДЕЛЬТА мг/куб. м, P = 0,95,

дельта x X

где ДЕЛЬТА = -----------, мг/куб. м.

100

Результат измерений должен иметь тот же десятичный разряд, что и

погрешность.

11. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. Разработчики

Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н. (Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, г. Мытищи Московской обл.); Брагина И.В. (Федеральный центр гигиены и эпидемиологии Роспотребнадзора).